产品信息

1.分子别名
Claudin-18.2, CLDN18, Claudin-18.

2.表达区间及表达系统
Fluorescent Human Claudin-18.2 VLP通过Expi293细胞表达，膜上蛋白结构为：Human Claudin-18.2-GS-GFP，对应的Human Claudin-18.2氨基酸序列为AA Met 1 - Val 261 (UniProt: P56856-2)。

3.偶联物
GFP.

4.制剂
本产品经0.45µm滤器过滤，保存于8%海藻糖的PBS中，PH7.4。

5.运输
干冰运输。

6.存储
-80℃。

7.应用
流式检测靶向Claudin-18.2 CAR-T细胞表达；Elisa；抗原免疫等。

产品验证
1.活性-FACS

图1. 分别取2×10⁵个的T细胞和靶向Cludin-18.2 CAR-T细胞，分别使用5µl Fluorescent Human Claudin-18.2 VLP，按照标准流式方法染色并检测（FITC通道）。图左：T细胞，图右：靶向Cludin-18.2 CAR-T细胞。

2.均一性-DLS

图2. Fluorescent Human Claudin-18.2 VLP平均纳米粒径为200nm左右（动态光散射检测DLS）。

使用方法
1.准备细胞样品。将细胞用移液枪充分吹打混匀，取2×10⁵个细胞加入EP管。
2.细胞离心。向EP管中加入1ml FACS buffer，300g离心3分钟。
3.孵育。去除上清，加入100µl FACS buffer，然后加入5µl Fluorescent Human Claudin-18.2 VLP，用移液枪吹打混匀，避光孵育30分钟。
4.细胞清洗。向孵育管中加入1ml FACS buffer，300g离心3分钟后，去除上清，用200µl FACS buffer重悬细胞沉淀。
5.上机检测。为获得最佳结果，尽快使用流式细胞仪分析细胞。

背景
1.Claudin-18.2
Claudin基因属于细胞紧密连接蛋白家族（紧密连接，又称闭锁小带，是两个细胞间紧密相连的区域），它们可以控制细胞之间的分子流动。在人类中，至少有27种claudin蛋白，不同的Claudin基因在不同的组织表达，他们功能的改变与相应组织的癌变有密切的关系。其中Claudin-18.2是表达具有高度特异性的跨膜蛋白，Claudin-18.2表达具有高度特异性，在健康组织中仅局限表达于胃黏膜分化的上皮细胞，而在肿瘤中，Claudin-18.2广泛被激活而高表达于胃（70-80%）、胰腺（60%）、卵巢、肺等组织。肿瘤细胞极性的紊乱可导致细胞表面Claudin-18.2蛋白表位暴露，并出现异常激活。由于Claudin18.2高度选择、稳定地表达于特定肿瘤组织，参与肿瘤细胞的增殖分化和迁移，这使其成为潜在的抗肿瘤药物靶点。

2.类病毒颗粒（VLP）
类病毒颗粒（virus-like particle，VLP）是含有某种病毒结构蛋白的空心颗粒，呈二十面体或者棒状结构，缺乏病毒核酸，不能自主复制，在形态上与真正病毒粒子相同或相似，俗称伪病毒。VLP可分为两大类:非包膜VLP和包膜VLP，非包膜VLP通常由病原体的一个或多个成分组成，具有自组装成颗粒的能力，不包括任何宿主组分；包膜VLP是相对复杂的结构，重组表达系统自组装成颗粒进入宿主细胞后，以出芽的方式从宿主细胞膜释放，形成由宿主细胞膜和显示在外表面的整合靶抗原的颗粒。VLP可以由多种不同的表达体系生产，包括原核表达系统、酵母表达系统、昆虫表达系统、植物表达系统以及哺乳动物细胞表达系统。VLP 是高度组织化的结构，粒径直径大小在60-300nm之间。由于其基础几何形状，它们类似于病原体相关结构模式 (PASP)，可以被免疫系统的细胞和分子有效识别，激活体液免疫应答和细胞免疫应答，因此VLP具有很强的免疫原性和生物学活性。在用途上，除可以利用VLP内空腔作为载体来递送生物活性物质或者纳米材料，比如基因、肽、蛋白质、药物、疫苗、成像物质等，VLP技术还可以将表达在细胞膜表面的膜蛋白组装在类病毒颗粒表面，获得正确折叠的完整多次跨膜蛋白，从而用于免疫和抗体筛选。